目的：综述串联质谱法在合成多肽药物结构表征方面的应用进展，为该类药物的结构表征提供方法参考。方法：以“合成多肽药物”“多肽测序”“串联质谱”“质谱法”“结构确证”“Synthetic polypeptide drugs”“Peptide sequencing”“Tandem mass spectrometry”“Mass spectrometry”“Structure interpretation study”等为关键词，组合查询了2000年1月－2019年1月中国知网、万方、维普、Springer Link、Web of Science、PubMed等数据库中的相关文献，对串联质谱法应用于确证合成多肽类药物结构的研究进展进行归纳与总结。结果与结论：共检索到相关文献192篇，其中有效文献52篇。合成多肽药物主要由氨基酸构成，这类药物在结构确证研究方面与一般药物有所不同。根据目前相关技术指导原则以及有关文献研究，合成多肽药物结构表征的主要内容包括分子量测定、氨基酸组成和序列分析、二硫键分析以及二级结构分析等。近年来，串联质谱法及其与其他方法的结合在合成多肽药物结构确证中应用广泛，成为Edman降解多肽测序法的有效补充，且其因灵敏度高、分析速度快、所需样品量少等优点，已成为确证多肽药物结构的有力工具。