狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究

马立威; 陈哲; 王文豹; 张金玲; 张洪涛; 葛鹏玲; 刘吉成

doi:10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.11

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狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究

药学研究 | 更新时间：2024-02-19

- 狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究
- Study on the mechanism of diterpenoid DP from Euphorbia fischeriana against leukemia
- 中国药房 2023年34卷第7期页码：825-831
- 作者机构：
  
  1.齐齐哈尔医学院医药科学研究院（博士后工作站），黑龙江齐齐哈尔;161006
  2.黑龙江中医药大学博士后流动站，哈尔滨　150040
  3.齐齐哈尔医学院公共卫生学院，黑龙江齐齐哈尔　161006
  4.齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江齐齐哈尔　161006
  5.齐齐哈尔医学院附属第三医院妇产科，黑龙江齐齐哈尔　161099
- 作者简介：
  
  副研究员，博士。研究方向：天然药物抗肿瘤。E-mail：maliwei@qmu.edu.cn
  教授，博士生导师，博士。研究方向：天然药物抗肿瘤。E-mail：jcliu@qmu.edu.cn
- 基金信息：
  
  黑龙江省中医药管理局科技计划项目(ZHY2020-179);齐齐哈尔市科技计划联合引导项目(LHYD-202028)
- DOI：10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.11
  中图分类号： R966;R285
- 纸质出版日期：2023-04-15，
  
  收稿日期：2022-10-09，
  
  修回日期：2023-03-07，
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马立威,陈哲,王文豹等.狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究 ^Δ[J].中国药房,2023,34(07):825-831.

MA Liwei,CHEN Zhe,WANG Wenbao,et al.Study on the mechanism of diterpenoid DP from Euphorbia fischeriana against leukemia[J].ZHONGGUO YAOFANG,2023,34(07):825-831.
马立威,陈哲,王文豹等.狼毒大戟中二萜类化合物DP抗白血病的作用机制研究 ^Δ[J].中国药房,2023,34(07):825-831. DOI： 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.11.

MA Liwei,CHEN Zhe,WANG Wenbao,et al.Study on the mechanism of diterpenoid DP from Euphorbia fischeriana against leukemia[J].ZHONGGUO YAOFANG,2023,34(07):825-831. DOI： 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.07.11.

摘要

目的

探究狼毒大戟中二萜类化合物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（DP）能否通过磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路发挥抗白血病的作用，为将其开发成抗白血病新药提供实验依据。

方法

以LY294002（PI3K特异性抑制剂）为工具药，采用MTT、Annexin Ⅴ-FITC/PI、AO-EB染色法观察并测定DP作用24 h后对人原髓细胞白血病细胞HL60增殖、凋亡的影响；采用ELISA法测定DP作用24 h后细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放量及细胞中胱天蛋白酶3（caspase-3）、caspase-9的活性。采用实时荧光定量-PCR法检测DP作用24 h后细胞中caspase-3、caspase-9、叉头框O3a（FoxO3a）、B细胞淋巴瘤2细胞死亡的相互作用介质（Bim）的mRNA转录水平；采用Western blot法检测细胞中磷酸化FoxO3a（p-FoxO3a）、磷酸化Akt（p-Akt）的蛋白表达水平，并采用免疫染色法在激光共聚焦显微镜下观察细胞中FoxO3a蛋白核转位情况。

结果

10 μmol/L DP和10 μmol/L DP+LY294002对HL60细胞有明显的增殖抑制及凋亡诱导作用（

＜0.01）；5、10、20 μmol/L DP作用后的细胞均呈典型的凋亡形态学特征，细胞培养液中LDH释放量和细胞中caspase-3、caspase-9活性均显著升高（

＜0.05或

＜0.01），其作用具有一定的浓度依赖性趋势；10 μmol/L DP和10 μmol/L DP+LY294002作用后细胞中caspase-3、caspase-9和Bim mRNA转录水平均显著升高（

＜0.05或

＜0.01），FoxO3a mRNA转录水平和p-FoxO3a、p-Akt蛋白表达水平均显著降低（

＜0.05或

＜0.01）；10 μmol/L DP+LY294002组细胞可见FoxO3a蛋白的核转位变化，且该变化较LY294002组明显。

结论

DP可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制人白血病HL60细胞增殖并诱导其凋亡。

Abstract

OBJECTIVE

To explore whether diterpenoid 12-deoxyphorbol-13-palmitate （DP） from

Euphorbia fischeriana

can exert anti-leukemia effects through the phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/protein kinase B （Akt） signal pathway， and to provide experimental evidence for developing it into a new anti-leukemia drug.

METHODS

Using LY294002 （PI3K specific inhibitor） as tool drug， the effects of 24 h DP treatment on the proliferation and apoptosis of human myeloid leukemia HL60 cells were detected by MTT method， Annexin Ⅴ-FITC/PI staining and AO-EB staining. ELISA method was used to detect lactic dehydrogenase （LDH） release and the activities of cysteinyl aspartate specific proteinase 3 （caspase-3） and caspase-9. The transcriptional level of caspase-3， caspase-9， forkhead box O3a （FoxO3a） and B cell lymphoma 2 interacting mediator of cell death （Bim） mRNA were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction （qRT-PCR）. The protein expression of phosphorylated FoxO3a （p-FoxO3a） and phosphorylated Akt （p-Akt） were detected by Western blot method. The nuclear translocation of FoxO3a protein was detected by immunostaining combined with laser confocal microscopy.

RESULTS

10 μmol/L DP and 10 μmol/L DP+LY294002 could inhibit the proliferation and induce the apoptosis of HL60 cells （

＜0.01）. After treatment of 5， 10， 20 μmol/L DP， HL60 cells showed typical morphological characteristics of apoptosis； DP could significantly increase the levels of LDH release and the activities of caspase-3 and caspase-9 （

＜0.05 or

＜0.01）， in dose-dependent manner. After treatment of 10 μmol/L DP and 10 μmol/L DP+LY294002， the transcriptional levels of caspase-3， caspase-9 and Bim mRNA were increased significantly （

＜0.05 or

＜0.01）， and transcriptional level of FoxO3a mRNA and protein expressions of p-FoxO3a and p-Akt were decreased significantly （

＜0.05 or

＜0.01）. Nuclear translocation changes were observed in FoxO3a protein in 10 μmol/L DP+LY294002 group， and the change was more significant than that of LY294002 group.

CONCLUSIONS

DP can inhibit the proliferation and induce the apoptosis of HL60 cells via inhibiting PI3K/Akt signaling pathway.

关键词

狼毒大戟12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯人原髓细胞白血病细胞HL60磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

Keywords

12-deoxyphorbol-13-palmitatehuman myeloid leukemia HL60 cellsphosphoinositide 3-kinase/protein kinase B signaling pathway

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